ctDNA解析の評価に用いる16の遺伝子を患者ごとに設定するSignateraアッセイについてctDNA解析結果および腫瘍の全エクソームシークエンス解析結果を統合解析した。その結果、16遺伝子はイントロン・エクソン双方の変異から選択される一方、大腸がんの代表的なtruncal mutationであるAやBは、80％の症例で変異を認めるにも関わらず、変異例の20%程度が16遺伝子に選択されるのみであった。16遺伝子に選択されたAやBは、術前ctDNA解析において約80%の症例で変異の検出に成功しており、再発例でも60%以上（21/32例）で画像上再発より先に変異が検出された。原発・再発ペア検体については、14例の全エクソームシークエンス解析の結果を比較したところ、4例では変異数の有意な増加を認めたが、その他の症例では変異遺伝子数に大きな変化を認めなかった。ctDNAは14例中13例で画像上再発が判明する以前の検査で検出され、このうち半数はA, Bいずれかの変異が検出されていた。以上より、大腸がんでは、truncal mutationとしてAとBに変異が認められた場合には常に16遺伝子に組み込むことで検出率が向上する可能性が考えられた。
　ctDNA捕捉失敗例の原因を解明するため、Stage II/III症例の術前ctDNAの検出状況を調べたところ、1353例中63例（4.7%）で陰性を示した。これらの変異症例の遺伝子異常について検討した結果、術前ctDNA陰性例は、WNTシグナルに関わる既知の遺伝子変異が少ない一方で、Xパスウエイに関与する遺伝子の変異が有意に認められた。Xパスウエイに関与する遺伝子の一部は、機能消失によりWNTシグナルが活性化することが近年示されており、術前ctDNA陰性例ではこれらの遺伝子変異によりWNTシグナルを活性化すると考えられた。次にRNAシークエンスによる発現解析結果に基づくパスウエイ解析を施行した。その結果、ctDNA陰性症例に特徴的なパスウエイを複数同定した。また、大腸がんでは発現プロフィルに基づきサブタイプ分類がされていることから、ctDNA陰性例の発現データを用いてサブタイプの判定を行ったところ、特定のサブタイプと有意に相関することが明らかとなった。さらに腫瘍の微小環境について推定を行うことにより、術前ctDNA陰性の原因としてYを同定した。