最終年度である令和４年度は、これまでに作製してきた[A]IgG型二重特異性抗体、および [B]環状小型二重特性抗体を用いて実験を進めた。昨年度までに、連結反応に成功し、[A][B]両課題の目的産物の作製に成功している。[A]IgG型では通常のIgG型と同等のサイズの分子であることをサイズ排除クロマトグラフィーで確認し、また、熱安定性もIgGと同様な安定性であることを示差走査型蛍光法によって明らかにした。Biacoreによるがん抗原への結合活性測定では親抗体のFabと同程度の結合活性を示した。[B]の小型環状化二重特異性抗体では示差走査型蛍光法によって直鎖状小型二重特異性抗体と同程度の安定性であることを確認した。昨年度に小型環状化二重特異性抗体の高い抗腫瘍活性をin vitro試験によって明らかにしていたので、マウス腫瘍移植モデルによる抗腫瘍活性評価に進んだ。マウスモデルでの測定は、研究開発計画における最終段階と位置づけており、そこまで計画通り完了できた。結果は、小型環状化二重特異性抗体の収量が比較的低いため、高濃度条件でのマウス測定に十分な量を調製できなかったため抗腫瘍活性は観察できなかったが、どの程度の濃度を用いるべきかの指針を明確にできた。
研究分担者　中西猛：動物細胞発現系により組換えタンパク質として標的分子を調製した。その標的分子をセンサーチップに固定化し、Biacoreにより二重特異性抗体の結合活性を測定した。
研究分担者　浅野竜太郎：がん細胞傷害活等の結果を考慮して、マウスモデルを用いた薬効評価を行う分子種を選定した。従来の二重特異性抗体との比活性を参考に、コントロール抗体、投与二重特異性抗体量、投与T細胞量、投与スケジュール、腫瘍モデル等を決定し、それぞれに必要な細胞の拡大培養、およびコントロール抗体の大量調製を行った。