令和４年度は、下記の研究結果・成果が得られた。
[代表機関：熊本大学]
(1) PEGリンカーを用いて環状scFvを二量体化した、anti-HER2/CD3二重特異性環状scFvおよびanti-CD19/CD3二重特異性環状scFvを調製し、in vitro生物活性評価に供した。
(2) anti-CD19/CD3二重特異性環状scFvについて、ヒトCD8⁺ T細胞とルシフェラーゼ活性を指標としたがん細胞（ヒトB細胞リンパ腫由来細胞株Ramos細胞）の細胞障害活性キット用いたin vitro生物活性評価を行い、EC₅₀を求めた。その結果、既に上市されているブリナツモマブ（anti-CD19/CD3二重特異性タンデム抗体）と同等の活性を示した。また、T細胞活性化をIL-2およびIFN-γ産生により評価したところ、これらサイトカイン産生のEC₅₀が、上記細胞傷害活性のEC₅₀と同等の濃度域であった。
(3) anti-HER2/CD3二重特異性環状scFvについて、(2) 同様の細胞障害活性キット（ヒト乳癌がん細胞株SKBR-3細胞）を用いたin vitro生物活性評価を行い、EC₅₀を求めた。その結果、リンカーで連結せずに個別の環状scFvを併用処理した場合には細胞障害活性は認められず、PEGリンカーで連結した二重特異性抗体のみが細胞障害活性を示した。また、IL-2およびIFN-γ産生のEC₅₀、SKBR-3細胞に対する細胞傷害活性のEC₅₀と同等の濃度域であることが確認された。
[分担機関：徳島大学]
anti-HER2およびanti-CD3環状scFvにポリプロリン導入型機能性ペプチドリンカーを導入したところ、機能性ペプチドリンカー導入による溶解性低下が問題となった。そこでポリプロリンの代替としてminiPEG導入型機能性ペプチドリンカーを合成し、導入したところ溶解性は低下しなかった。そこで、miniPEG導入型機能性ペプチドリンカーを用いた環状scFvの二量化の検討を進めている。
[分担機関：国立がん研究センター]
anti-HER2環状scFvについて、CDXマウスを用いたin vivoイメージング解析を行い、固形がんに対して二重特異性低分子抗体が十分な治療効果を発揮するためには、半減期が短くとも効果を示す薬剤とがん種の選択、投与スケジュールの再設定、半減期を延長させる薬物送達の検討が求められる。そのため、血中半減期を延長させるには、PEG化などによる分子量の増大などが考えられる。
本研究により開発された「環状一本鎖抗体を構成ユニットとする二重特異性抗体」は、BiTE抗体として機能し、がん細胞を殺傷することが示された。また、これらのBiTE抗体が十分な治療効果を発揮するための課題が示唆された。