本実験調査は、Src Family Kinase (SFK)のがんシグナルを阻害する新規創薬標的として、これまでの研究で見出したSFKがんシグナル伝達の鍵となるプロテインキナーゼX（以下Xとする）の阻害剤探索を目指すものである。令和3年度は、昨年度までの研究で選定したリード化合物についてin vivo抗腫瘍効果の解析と導出活動に必要な実験データの取得・整備を行った。まず、選定したリード2化合物について細胞での評価を再度行い、1化合物Y（以下Yとする）をin vivo抗腫瘍評価試験に供することにした。Xの活性の高いがん細胞2種の担がんモデルマウスにて経口投与を行ったところ、Yは顕著な抗腫瘍活性を示したが、体重減少や他臓器における形態的な障害は認められなかった。また試験後の腫瘍組織について解析を行い、投与群においてXの下流がんシグナルの活性化も抑制されたことから、リード化合物YがXの機能を阻害することで抗腫瘍活性を示すことが示唆された。さらに導出活動に必要なデータとして、①がん細胞増殖抑制活性、②作用機序の解析、③Xへの直接結合、④正常細胞に対する細胞毒性、⑤他のキナーゼ阻害剤との比較を行い、データを取得した。これらの結果から、X機能阻害剤Yは、SFK活性の高いがん細胞に既存のキナーゼ阻害剤とは異なる作用点で機能し、マウスにおける経口投与でのがん抑制作用が見られることが明らかとなった。