①感染早期における潜伏感染細胞形成メカニズム解明に関して、
昨年度までに、JurkatとTHP-1細胞でそれぞれ10のタイマーHIV感染クローン樹立を行い、各クローンにおけるプロウイルスのコピー数と全塩基配列、組み込み部位情報を、HIV-1 DNA-capture法にて決定した（Sci Rep 2019）。各感染クローンは、基本的に潜伏状態を示すが、一部の細胞は自発的なタイマー蛍光タンパクが陽性となり、sporadicに潜伏解除して、ウイルス発現がONになる分画が存在する事が判明した。これらクローンに対して、潜伏促進剤を加えると、潜伏の促進効果を認めたことから、本研究で樹立した感染クローンは今後のHIV潜伏感染を標的とした薬剤評価やメカニズム研究に有用な資源になると考えられた。ウイルス遺伝子発現動態の定量的評価のために、昨年度樹立したタイマー蛍光タンパク計測によるHIV感染細胞の内部状態を考慮した多階層数理モデルを用いて、潜伏感染解除薬剤（LRA）のウイルス遺伝子発現への影響など評価し、現在研究成果を論文発表準備が進行中である。また、タイマーHIV感染細胞のそれぞれのタイマータンパク陽性分画をソーティング後、シングルセル解析を行い、潜伏化に関わる因子の探索を行っている。
②慢性持続潜伏期における潜伏感染維持メカニズム解明に関して
初年度に引き続き、従来とは異なる新しい作用機序、よりウイルス特異性の高い作用機序を有するLRAの開発を目指した研究を進めた。Nanolucレポーター遺伝子を搭載HIV潜伏感染細胞THP-1クローンを用いて機能遺伝子発現抑制細胞ライブラリー解析で特定した、潜伏感染維持に関わる宿主分子を同定し、その中の１つ分子Ａについて更なる検討を進めた。その遺伝子発現をノックダウンするとHIVの再活性化を認め、RNA-seq解析により、従来のLRA処理に比べ、ノックダウン細胞では、プロウイルスにより特異的高く転写活性促進作用を有するとの結果を得た。これらの結果から、分子Ａはプロウイルス特異的潜伏感染解除薬剤（LRAs）の標的候補分子と考えられる。さらに、分子Aの阻害剤の候補が複数特定されたため、現在更なる解析を進めている。

③In vivo解析に関して
国立国際医療研究センター エイズ治療・研究開発センターにてHIV感染者症例の集積を継続して行った。昨年度より分担者に加わった山本拓也博士とともにSIV感染カニクイザルのcontrollerとprogressorの２群で脾臓中のCD4T細胞分画をソーティングして、DNA,RNA抽出を行い、生体内におけるウイルスリザーバの局在が、従来の報告通りにTfh分画に多く存在する事を確認した。In vivoのウイルスリザーバの解析モデルとして、同霊長類モデルが有用である事が示された。