これまでの研究においてHBV複製に重要な4つの宿主遺伝子DOCK11、LIPG、DENND2A、HECW2を得た。これらを標的とする抗HBV薬の開発を本研究の目的とした。これらの宿主遺伝子とHBVとのウイルス学を行う研究と、抗HBV薬の開発を行う研究の2つを並行して進めている。HBVが核内へ到達する経路として、私達はearly endosomeからGolgiに逆行し核内に到達するユニークなGolgi逆行性系路の存在を明らかにした。DOCK11は細胞質内においてはGolgi逆行性系路に関わる分子Aと結合し、HBVのGolgi逆行性系路を活性化し、ERを介して核内へのHBVゲノムの輸送に役立っていた。核内においては、DOCK11は主にDNA修復領域である核辺縁部に局在しており、一部、転写活性の強い核内部にも局在が認められ、クロマチンの解析と細胞内局在から、DOCK11はcccDNAの産生・修復・転写に関わっていることが予想された。DOCK11会合遺伝子であるTankyraseと関連遺伝子βカテニンがcccDNA維持機構に関与することを突き止めた。PXB細胞およびHepG2.15.2細胞におけるDOCK11免疫沈降によりβカテニン抗体の陽性を確認し、cccDNA核内輸送が各種阻害剤で減少することが認められた。抗HBV薬の開発では、DOCK11 DHR2-Cdc42相互作用のin silicoヒット化合物構造をもとに作製した約100種類の誘導体と、生薬およびその活性成分化合物ライブラリーの約300種類の化合物をNanoBRET法で阻害活性を測定したところ、新たなヒット化合物を含め合わせて5個の研究開発候補化合物を得ることができた。これらの活性は細胞毒性と適度に分離でき、HBV DNA、cccDNAの産生抑制作用によるB型肝炎治療薬としての開発が期待された。IVV法を用いてDOCK11、DENND2AおよびLIPG結合ペプチドを見出した。肝臓細胞内へペプチドを選択的に送達させる新しいモダリティを構築し、ヒト肝細胞キメラマウスを用いた抗HBV活性評価においてcccDNAの抑制効果を示した。HBV感染肝がん細胞株Hep2.2.15において、無修飾のDock11 siRNAと比較して低濃度(10nM)でも約3倍のDock11の発現阻害効果とcccDNAの抑制効果がある核酸修飾したsiRNAを同定した。
計画は順調に進捗した。