本研究は、DNA転移酵素（トランスポゼース）を用いた遺伝子導入法を最適化し、導入効率50％以上かつ10kb以上の長遺伝子の導入法をマーモセットで確立することが目的である。これまでにマウス受精卵を用いて、最適トランスポゼース種をpiggyBacに決定し、10kb以上の導入遺伝子でゲノムインテグレーション率50％以上の2条件を決定してきた。本年度は、この2条件でマーモセット受精卵の遺伝子導入実験を実施した。
１．マンニトールとOPTI-MEMの検討
マウス受精卵を用いた実験で、マンニトール溶液あるいはOPTI-MEMをエレクトロポレーション時の溶媒とした2条件を決定した。この2条件で、マーモセット受精卵への遺伝子導入を実施した。マンニトール溶液を用いた条件で7個のマーモセット受精卵への遺伝子導入を行った結果、割球同士の融合が認められた。マウスに比べマーモセット受精卵は、透明帯が厚く、割球同士がタイトに密着しており、これが原因でマウス受精卵では避けられた割球融合が避けられなかったと考えられた。念のため実施したPCR解析の結果、7個中5個（71.4%）で高率でトランスジーンの導入が確認された。一方、OPTI-MEMを用いた場合は、割球の融合は見られず、マーモセット受精卵への遺伝子導入に適応可能であったため、OPTI-MEMを用いた条件に決定した。
２．マーモセットES細胞樹立の検討
　確実なトランスジーンのゲノムへの挿入を見るため、遺伝子導入した受精卵からES細胞の樹立を試みた。12個の受精卵へOPTI-MEMを用いた条件で遺伝子導入し、マウス胎子線維芽細胞(MEF)上に播種し、7日から21日間培養した。しかしながら、10個の受精卵が退行・消失し、ES細胞の樹立は出来なった。一方で、MEF上に残存した2個のマーモセット受精卵由来細胞をPCR解析した結果、2個中1個（50.0%）でトランスジーンの導入が確認された。
３．OPTI-MEMを用いた遺伝子導入
　ES細胞の樹立が困難であったため、OPTI-MEMを用いた条件で遺伝子導入したマーモセット受精卵を7～10日間と長期培養し、PCR解析に供試した。また、ゲノムインテグレーションしたトランスジーンのみを検出するため、ベクターの挿入部位(hAPPtg)と非挿入部位(BII)を同時にPCR解析し、hAPPtgのみ検出された受精卵を算出した。その結果、31個中20個（64.5%）でトランスジーンの導入が確認された。
　以上、OPTI-MEMを用いた条件でマーモセット受精卵への遺伝子導入率が64.5％であり、目標の50％以上の遺伝子導入率を達成した。