＜PCR-MRD 評価不能 ALL における MRD 評価系の確立＞ EuroMRD で共同開発を進めている次世代シーケンサー（NGS）を用いた MRD 測定において、2 段階の PCR 増幅に伴うコンタミの発生が問題となり、一度の PCR 増幅で当該領域の増幅とシーケンスに必要な配列の付与を可能とするprotocol への修正を行った。白血病細胞株由来 DNA を spike-ins コントロールとして、高感度なMRD 測定系を構築した。clonal な再構成が検出されない症例においては、NGS を用いても MRD 評価はできない。そこで、IGH 再構成陰性 B-ALL ならびに TCR 再構成陰性 T-ALL において、IGH とTCR 領域の構造異常を解析した。その結果、IGH 再構成陰性例 16 例中で 15 例に欠失などの構造異常を認め、IGH 再構成後に同領域の欠失が生じたことにより、再構成が消失したと推測された。欠失の切断点に相補的な配列を用いた MRD 評価の有用性を検討中である。一方で、T-ALL においては TCR 領域に clonal な構造異常は認められなかった。さらに、PCR-MRD 解析が時に困難である症例を中心に、より高い感度で測定できる FCM-MRD 手法を構築した。MLL-10 で PCR-MRD と FCMMRD の結果が乖離した症例で、FCM 陽性/PCR 陰性の症例の予後は悪く、PCR で捉えられなかったマイナークローンを FCM では捕捉していた可能性が示唆された。
＜乳児 ALL における MRD 評価技術の検討ならびに MRD 陰性到達後早期再発例のクローン解析＞MLL 転座陽性例対象に、NGS による転座切断点の同定と転座切断点を用いた MRD 評価系を構築し、次期国際共同試験における MRD 評価への導入に向けて、結果報告までに必要な時間・コストなども含めて検証を行った。MLL 切断点による評価の有用性を検証するために、ddPCR を用いた、正確なクローンサイズの評価を行った。約 20％の症例では、ほぼすべての MLL 転座陽性細胞が同一の再構成を有していたが、40％の症例においては大半の細胞に共通した再構成はなく、多くの再構成が検出された。後者のようなクローン構造の複雑な症例は、MRD 評価が困難であるとともに、予後も不良で多かった。クローン構造理解に基づき多面的な MRD 評価は、正確な MRD 評価と治療成績の改善に不可欠であると考えられた。