課題全体の研究成果
本研究は、抗HBs人免疫グロブリン（HBIG）および抗破傷風毒素（TeNT）人免疫グロブリン（TTIG）の遺伝子組換え型免疫グロブリンを開発し、その実製造へ向けての基礎データを獲得することを目標とする。これまでに両者とも複数のヒト由来抗体の遺伝子を得、その組換えIgG1を作製・精製した。
1） 抗体の機能評価
・HBVの各遺伝子型の中和能を調べるため、HBV陽性献血者血液よりgenotype A (Ae, A1)およびB (Ba, Bj) を高濃度で含む血漿を確保した。これらをin vitro感染中和実験の感染源として用いるために、ヒトキメラマウス初代培養肝細胞を用いて馴化し、高い感染効率のウイルス溶液を得た。
・TeNTのHc、Hn、およびLcドメインに対する４種類の抗体は、マウスにおける中和試験において全て中和活性を有していた。その中和活性は、抗体クローンの混合投与により相乗的効果を示した。
2）抗体の品質試験
・HBIGについては2クローンを表面プラズモン共鳴（SPR）試験に供した。一方はHBsAgに対して非常に高い親和性を有していた。他方は抗体高濃度条件でHBsAgへの結合が見られた。示差走査型蛍光測定法では両抗体とも良好な熱安定性を示したが、酸性条件における熱安定性に違いがみられた。またnanoparticle tracking解析と流路イメージ解析により、溶液中での抗体凝集傾向を評価した。両クローンとも最適化が必要ではあるが、医薬品シーズとしての十分なポテンシャルを有すると考えられた。
・TTIGについては、Hnドメインのリコンビナント変異抗原との結合性を見ると、Hnエピトープがアミノ酸の835～849番目の領域に存在することが明らかとなった。この領域は細胞結合侵入に伴うTeNT構造変化に影響を与える領域であることが予想された。一方、抗体フレームワークグラフティング試験により、より産生能の高い抗体クローンの選択が可能であることが分かった。
3）安定した発現細胞株の樹立と小規模な試験製造
・HBIGについては、CHOを用いた安定発現株の樹立を目指したが、H鎖が発現せず中断している。
・TTIGについては、マウスミエローマ細胞株ではなくCHO細胞株を用いてMaster cell bank (MCB)作成を完了した。それぞれ小規模生産に対応できるだけの産生量を維持する細胞株であることが明らかとなった。
4）リコンビナントヒトIG製造に必要な品質管理システムの構築と、5）抗体リソースの拡大については、新型コロナウイルス流行対応のため、遂行できなかった。

研究代表者の研究成果
　上記の成果を総合的に評価し、TTIGの4クローンは十分に特許出願に値するものと判断して特許を出願した。PCT国際特許出願の用意も準備している。HBIGの2クローンについては、抗HBsのリガンドエピトープがまだ決定されていないが、抗体のCDR配列が極めて特徴的なことから、特許を出願した。また、AMEDの知財リエゾン、知財コンサルタントと協議を継続し、これら抗体シーズの製薬企業への導出の可能性を探った。現時点では、有力な企業は見いだせていない。