＜課題全体＞
1） 発現用アデノ随伴ウイルス(AAV)ベクターの作製：LOTUS遺伝子を組み込んだAAVベクターを作製した。ヒトLOTUS遺伝子組込AAVベクター、及びマウスLOTUS遺伝子組込AAVベクターの双方を作製し、作製したAAVベクターによってLOTUSが発現するかどうかについて神経系の細胞に感染させてウエスタンブロティング法で検討したところ、LOTUSの発現が確認できた。
2） 脊髄損傷モデル動物におけるAAVベクター投与実験：脊髄損傷モデルマウスに対してマウスLOTUS遺伝子組込AAVベクターを損傷直後に患部周辺の髄腔内に投与し、損傷後の効能について行動学的、及び組織学的に解析した。損傷直後にAAVベクターを投与した場合、対照群（溶媒：PBS投与群）に比してLOTUS-A A Vベクター投与群は有意な歩行機能改善が認められた。組織学的解析については、現在解析中である。現時点での結果から、LOTUS組込AAVベクターの髄腔内投与は脊髄損傷に対して機能改善効果をもたらす可能性が示された。
3） 安全性予備試験：野生型成体マウスに擬手術を施して髄腔内に実験と同量のAAV.GTX-LOTUSを導入し、行動学的解析と組織学的解析によって異常の有無を解析中である。また、非臨床安全性予備試験（信頼性基準）として別途にラットで臨床投与経路と同一の髄腔内投与を行い、現在経過観察中であるが、ベクター投与後2ヶ月の段階では肉眼的異常は認められていない。GLP非臨床安全性試験のプロトコルを策定してPMDA対面助言において書面にて確認された。

＜研究代表者＞
1） 脊髄損傷モデル動物におけるAAVベクター投与実験：脊髄損傷モデルマウスに対してマウスLOTUS遺伝子組込AAVベクターを損傷直後に患部周辺の髄腔内に投与し、損傷後の効能について行動学的、及び組織学的に解析した。損傷直後にAAVベクターを投与した場合、対照群（溶媒：PBS投与群）に比してLOTUS-A A Vベクター投与群は有意な歩行機能改善が認められた。組織学的解析については、現在解析中である。現時点での結果から、LOTUS組込AAVベクターの髄腔内投与は脊髄損傷に対して機能改善効果をもたらす可能性が示された。
安全性予備試験：野生型成体マウスに擬手術を施して髄腔内に実験と同量のAAV.GTX-LOTUSを導入し、行動学的解析と組織学的解析によって異常の有無を解析中である。また、非臨床安全性予備試験（信頼性基準）として別途にラットで臨床投与経路と同一の髄腔内投与を行い、現在経過観察中であるが、ベクター投与後2ヶ月の段階では肉眼的異常は認められていない。GLP非臨床安全性試験のプロトコルを策定してPMDA対面助言において書面にて確認された。