前年度までに、線維芽細胞の接着斑における牽引力ダイナミクスをイメージングする実験系を確立し、ナノスプリングを用いた力計測ができるようになってきた。そこで、データ取得と解析を進めてきた。本実験では、ナノスプリングフォースセンサを固定したディッシュ上にパキシリンGFPを発現させた線維芽細胞を載せて1時間後にパキシリンGFPとフォースセンサの2色観察を行った。成熟した接着斑上のセンサとそうでない部位においてセンサの伸展の様子が異なり、成熟している領域でのセンサのほうが高い伸展率を示した。また、30秒間の観察時間において、ほぼ伸展率が変化しない静的な牽引と伸展率が秒オーダーで変化する動的な牽引の2種が観察された。伸展率から力の大きさを定量するために、ナノスプリングの弾性測定を実験の培地条件下において行った。ナノスプリング弾性が溶媒環境によって変化する可能性を懸念していたが、ロバストに弾性特性が維持されることが音響力顕微鏡による測定によって分かった。次に、ナノスプリングの蛍光画像から、その長さを正確に評価するために、DNAorigami技術を用いて、ナノメートルサイズのものさしを作成した。400―800 nmの長さに均等に色素を配置したものさしを使って、蛍光画像を取得し、2次元ガウスフィットによって得られる長軸方向の標準偏差とものさしの長さが直線関係となり、このデータを較正データとして、ナノスプリングの蛍光画像から正確に長さを見積もった。以上より、実験で得られたフォースセンサの蛍光画像解析より、成熟した接着斑では、1-20 pNに渡る牽引力を発生し、成熟していない領域では、数pN程度の牽引力しか発生しないことが分かった。さらに、20 pN近い牽引力では、動的に力が変動する割合が高く、伸展時には数nm/sで伸展し、短縮時にはステップ状にすばやく変化する傾向が得られた。一般的な牽引力測定法である、ピラーアレイやトラクションフォース顕微鏡では、数百分子近いインテグリンを介した牽引力測定となり、個々のダイナミクスは平均化されてしまい、その分子メカニズムに関わる情報が少なくなってしまうが、今回、インテグリン1分子由来の牽引力の経時変化を初めてモニターできるようになったことで、詳細な分子メカニズムに迫れると考えている。現在、論文執筆中であり、投稿に向けて準備を進めている。