（テーマ１）ヒト線維肝の再生マーカーとしてのOGFRL1の有用性の検証
インフォームド・コンセントが得られた肝疾患患者の組織標本を用いて、OGFRL1の免疫染色を行った。正常肝組織においてはOGFRL1は確認されなかったのに対して、急性肝炎の急性期には肝組織に浸潤した炎症細胞、とりわけCD11c陽性マクロファージに強い染色所見が認められた。また、浸潤した炎症細胞の周囲に存在する肝実質細胞にもOGFRL1の局在を認め、重症化した急性肝不全症例では増殖した偽胆管細胞でもOGFRL1が強く染色された。一方、慢性肝疾患の進行に伴って肝組織中のOGFRL1発現は減弱し、とりわけ硬変肝組織では炎症細胞と肝細胞のいずれにもOGFRL1はほとんど検出されなかった。
次に、部分肝切除を施行した原発性もしくは転移性肝癌症例を対象として、末梢血中のエクソソーム内包OGFRL1タンパク質をウェスタンブロット法により検出した。その結果、転移性肝癌に対して部分肝切除を行った症例において、術前は認められなかったOGFRL1タンパク質が術後一過性に検出され、背景肝が正常であることと併せて、部分切除術後の良好な肝再生を反映していることが示唆された。一方、肝硬変を背景とした原発性肝細胞癌症例においてOGFRL1の出現は確認できなかった。以上の所見から、進行した肝硬変症例に対して再生促進因子OGFRL1を外来的に投与することの有用性が示唆された。
（テーマ２）ヒトOGFRL1の高発現系の構築
（テーマ3）ヒトOGFRL1搭載エクソソームの投与効果の検討
コリン欠乏アミノ酸置換食給餌と四塩化炭素投与を組み合わせることで独自に開発したNASHモデルマウスに対して、昨年度までのテーマ２で開発したエクソソーム高発現系を用いて作製したOGFRL1搭載エクソソームを投与し、対照群と比較した。その結果、OGFRL1搭載エクソソームを投与したマウスでは、対照マウスと比較して肝線維化の改善が顕著であり、さらにOGFRL1搭載エクソソームと培養骨髄間葉系幹細胞を併用投与したマウスでは肝細胞の脂肪変性の軽減に加えて線維化のさらなる改善が確認されるなど、骨髄造血系細胞に由来するOGFRL1と骨髄間葉系幹細胞との相加もしくは相乗効果が示された。
さらに、その作用機序を明らかにするため、ヒトiPS細胞由来の肝前駆細胞から肝細胞を誘導する系を開発するとともに、レトロウイルスを用いてヒトOGFRL1を強制発現した。その結果、G protein coupled-signalやJak-Stat signal系などの細胞内シグナル関連遺伝子がOGFRL1発現により変化することを見出した。