<1> SARS-CoV-2感染モデルにおける補体の活性化の程度と期間の確認
SARS-CoV-2をカニクイザルに感染させ、経日的に肺所見をX線で確認したところ、肺炎所見が確認できた。体温も感染後1、2日目で基礎体温から2℃程度の上昇が確認できた。血小板の低下や補体価の低下が確認でき、補体活性化に伴う補体因子の消費が確認された。血管障害マーカーや凝固因子についても、感染後の増加が確認できた。このため、本SARS-CoV-2感染サルを用いて薬効評価を実施することとした。
<2> SARS-CoV-2感染カニクイサルにおける抗補体抗体の薬効確認試験
試験に使用するサルを６匹確保した。体重・年齢などをもとに3匹ずつ2群に群分けした。滋賀医科大学において麻酔下のカニクイザルに気管・鼻・喉からSARS-COV2を感染させ、直後に対照群としてPBS、薬剤投与群として補体因子抗体を皮下注射した。Day2体温では対照群・抗体投与群ともに体温上昇のピークを迎え、対照群では平均基礎体温比平均1.4℃の体温上昇に対して、補体抗体投与群は平均0.6℃の体温上昇にとどまり、抗補体抗体の皮下投与によりコロナウイルス感染による体温の上昇が抑制された。血小板は<1>の検討と同様に、対照群で低下が認められたが抗体投与群では血小板数の低下は認められなかった。凝固関連因子については抗体投与群でPAI-1の低下、フォンビルブラント因子(vWF)の低下、vWFの活性化抑制因子ADAMTS13の低下の抑制が認められた。補体抗体のpharmaco dynamic (PD) markerを確認したところ、補体経路の活性化低下が顕著に認められた。各種炎症因子も低下が認められた。全身血栓への影響をCarstairs staining染色で肺や肝臓、腎臓組織で観察したところ、低下傾向が認められた。以上の結果から補体因子抗体をSARS-CoV2感染カニクイサルに投与することで補体抑制に起因すると推察される体温低下や凝固因子の低下傾向が認められた。これらの結果は補体抑制によるCOVID-19症状改善作用をヒトと同様に症状を呈するカニクイサルで認められたことから、ヒトにおける補体抑制によるCOVID-19症状改善を示唆される重要な結果と考えられた。
<3> iPS細胞由来血管内皮細胞におけるSARS-CoV-2スパイクタンパクの補体活性化の確認と抗補体抗体による抑制効果の確認
SARS-CoV-2スパイクタンパクはヒト白血病細胞株(TF-1)細胞のへパラン硫酸に結合して補体経路を直接活性化することが報告されている*4。SARS-CoV-2は血管内皮細胞を傷害して、凝固・補体系を活性化すると推察されているため、iPS細胞を用いて血管内皮細胞に分化し、正常ヒト血清と既報で用いられているSARS-CoV-2スパイクタンパク（RayBiotech社）を添加したところ顕著な補体最終産物(membrane attack complex; MAC)の増加と補体因子抗体(100ug/ml)によるMAC抑制効果が確認できた。
<4>薬効試験に供する非GLP補体因子抗体の大量合成・精製法の確立
CHO細胞を用いて薬効評価に使用する非GLP抗体の合成・精製法を確立した。
<5> 合成補体因子抗体の特異性評価
約1万7千種類のヒトタンパク質を搭載したプロテインアレイを用いて、抗体の特異性評価・血中抗体のプロファイリングを実施する受託サービス（フナコシ）を用いて特異性確認を実施した。当該ペプチドパネルに抗体を処置し、目的補体タンパク以外に抗体が結合いないことを確認した。当該抗体が目的補体因子のみに結合し、高い特異性を持つことが確認できた。