研究1) 多様なニワトリ品種に適応可能なPGCs培養系の樹立: 先行研究におけるニワトリ始原生殖細胞 (= PGCs) のフィーダー・血清フリーの培養系は、増殖効率が低く、一部の産業有用品種にしか適応されないという課題が残されていた。本研究課題では、血清成分がニワトリPGCsの増殖を促進するという知見に基づき、血清代替物であるKnockout Serum Replacement(TM) (KSR) を添加することにより、PGCsの増殖効率が有意に高くなることを明らかにした。KSRの成分の一つであるAlbuMaxの添加によりKSRと同等の効果が認められたことから、ニワトリPGCsの増殖を支持する分子がAlbuMaxに含まれていることが示唆された。また、ニワトリPGCsの初代培養において細胞死が頻繁に起こるという発見に基づいて、アポトーシス阻害剤を添加して細胞死を抑制することにより、PGCsの株化効率が有意に向上することを明らかにした。これらの知見に基づいて培養系を改善した結果、ナショナルバイオリソースプロジェクト中核拠点のリソースであるBM-C系統を含む計15品種のPGCsの株化・培養に成功した。これらのうち、3品種については配偶子への分化能が確認されており、その他については今後解析予定である。研究2) ニワトリPGCs凍結保存法の改善: ニワトリPGCsは胚あたり数個～数十個程度と少なく、大量の細胞を供試することが困難であったため、これまで凍結溶液が十分に検討されていない。本研究課題では、培養したニワトリPGCsを用いて緩慢凍結法に適切な凍結保護剤を系統的に探索した。その結果、これまで使用されてきたジメチルスルホキシド (DMSO) の他に、プロピレングリコール (PG) において高い耐凍効果が認められた。また、トレハロースの添加により凍結融解後のPGCsの回収率が有意に向上すること、血清の添加により凍結融解後のPGCsの生存率が有意に向上することを発見した。これらの知見に基づいてニワトリPGCsの緩慢凍結法を改善した結果、凍結したPGCsの60%以上を融解後に生細胞とし回収することが可能になった。これらの細胞は、少なくとも移植後に宿主胚の生殖巣に生着する能力を有しており、配偶子への分化能については今後解析予定である。