40名のミトコンドリア病患者およびその保護者、40名のコントロール健常人およびその保護者、さらに11名の鑑別疾患患者にインフォームド・コンセントを実施し、標本を採取した。ミトコンドリア病患者およびコントロール健常人から尿を採取した。除タンパクなど前処理後、尿標本中のτm⁵Uおよびms²i⁶A、ならびに補正コントロールとしてacp³U量をLC/MSで測定した。τm⁵Uおよびms²i⁶A量の幾何平均をMELAS Indexとして表し、健常者とミトコンドリア病患者で同Indexを比較検討した。するとROC = 0．9796、95% CI = 0.9519～1.000、Cutoff値を0.743133とすると感度：100％。特異度＝88.57であった。この数値は既存のミトコンドリア病マーカーより優れており、非侵襲的にミトコンドリア病を診断する技術の原理検証ができた。カットオフ値の見定めも終了した。尿検体の保存・輸送に関するバリデーションでは、タンパク質や糖の混在量に関するバリデーションが終了した。慢性腎不全患者および糖尿病患者の尿献体でも前処理を実施することにより、τm⁵U、ms²i⁶Aおよびacp³U量を測定できることを明らかにした。さらに、①．尿検体採取～輸送、保存までの手順書原案、②．尿検体の前処理方法の手順書原案、および③．質量分析解析の手順書原案を作成した。