トリプルネガティブ乳がん臨床検体由来培養細胞を用いて、Dox誘導的CRISPR/Cas9システムにより蛋白質Xをノックアウトしたところ、細胞増殖能、スフェロイド形成能、幹細胞マーカー発現が低下した。PDX腫瘍が形成されたところでDoxを飲み水より投与して蛋白質Xのノックアウトを行った結果、腫瘍の増殖が有意に抑制され、蛋白質X阻害剤が実臨床で使用可能であることを示す重要なpreclinical POCが得られた。一方、正常に近いMCF10A細胞を用いて、レンチウイルスを用いたshRNAによる蛋白質Xのノックダウンを行った。その結果、MCF10A細胞の増殖能に対する効果はほとんど認められなかった。このことより、MCF10A細胞の蛋白質Xに対する依存度は低いことが示された。蛋白質X阻害剤の正常細胞に対する副作用は限定的であると考えられる。トリプルネガティブ乳がん臨床検体由来の培養細胞を用いて、Dox誘導的CRISPR/Cas9システムにより蛋白質Yのノックアウトを行った。蛋白質Yノックアウトにより細胞増殖能、スフェロイド形成能、幹細胞マーカー発現の低下が確認され、preclinical POCを確認。蛋白質Zについても、Dox誘導的CRISPR/Cas9システムによりノックアウトを行い、細胞増殖能の著明な低下をみた。低酸素培養法の確立、低酸素応答性転写因子HIFのタンパク質量の解析系や転写活性モニターシステムの構築など、低酸素応答性の解析に必要な実験系のセットアップを完了させ、解析中である。蛋白質XのHTSを行うために、その酵素ドメインをin vitro大量調整し、技術支援班の指導により、数々の条件検討を行った結果、CHO-THFと同時に生成されるADP量測定が最も定量性高く、至適反応条件を整えることができた。最終的に、これまでに強い活性が出ることが報告されている蛋白質Xの酵素ドメインからN末部分も含んだタンパクを作製した。