（1）被血管化能力を十分に有する腎臓組織の作製に成功した。腎臓オルガノイドの作成条件の最適化に関しては、腎臓オルガノイドを構成する前駆細胞（ネフロン前駆細胞とウォルフ管細胞）のうち、ネフロン前駆細胞の割合が増えるプロトコールを試した。具体的には、ヒトiPS細胞を5日間CHIR99021で処理し、後方の中間中胚葉に誘導するプロトコールを用いた。このプロトコールでは、糸球体の数や血管内皮細胞の発達が増加することが明らかになった。今後の腎臓オルガノイドの血管化実験には、このネフロンオルガノイドを用いることができるようになった。次に、腎臓オルガノイドの作製環境を複数条件試行し血管内皮ネットワークの形成に最適な培養条件を検討した。具体的には、気液界面、液中、ゲル中、マウス腎皮膜下、腸間膜下、で腎臓オルガノイドを作成し、血管形成をCD31抗体による免疫染色で評価したところ、気液界面およびマウス腸間膜下での培養が腎臓オルガノイドの血管形成を最もサポートする環境であることが判明した。気液界面で培養したオルガノイドはサイズも大きく成長し、内部の血管ネットワークも良く発達した。また、腸間膜への移植環境に関して、腎臓オルガノイドの血管化に最適なタイミングと、必要な時間を検討した。この知見を項目2-1と共有し、灌流デバイス内部に腎臓オルガノイドを配置するタイミングや、血管化に必要な培養期間の情報を供与した。（2）ネフロン前駆細胞の凍結技術の開発を行った。ヒトiPS細胞から作製したネフロン前駆細胞に対し、複数の市販の凍結試薬を用いた凍結法を行い、その後解凍し、ネフロンオルガノイドを形成させた。結果、どの凍結試薬を用いても、凍結前と同様にネフロン構造が発生することを確認した。（3）ヒトiPS細胞からウォルフ管細胞の分化誘導系を確立した。誘導効率を最適化し、85％以上の純度で尿管芽上皮細胞（CXCR4とC-kitの二重陽性細胞）を誘導する事に成功した。また、この細胞の拡大培養として、集合体をマトリゲル内部で増殖させ、さらにこれから発芽体を形成した。更に、この尿管芽上皮細胞に対する凍結技術の開発を行った。結果、尿管芽を凍結融解後に増殖させ、発芽体を形成させる事に成功した。凍結融解後の発芽体形成効率は100%を達成した。今後デバイス開発にウォルフ管細胞を用いる際は、この凍結した細胞を用いることが可能になった。