腸管免疫を利用した新規経口がんクチンとして、菌体表層にWT1タンパクを発現するビフィズス菌末を作製し、経口がんワクチンとして開発を進めた。本年度は、①作用機序に関する研究、マウス前立腺癌モデルでの②抗腫瘍効果と抗PD-L1との併用効果の確認、③製造・品質管理法の確立と原薬（B440）の製造、④ B440の用法・用量試験を実施した。また⑤他癌種での有効性も確認した。①作用機序の解明In vitro試験：ヒトDC細胞にワクチンを添加し、WT1タンパクのDC内への取り込み、DCの分化促進、HLA-DR（MHCクラスII）の発現増加、およびPD-L1の発現低下、を確認した。In Vivo試験（マウス）：ワクチンの経口投与によって、複数のエピトープに対する免疫反応が誘導されることを確認した。②前立腺癌での有効性の確認マウス前立腺癌TRAMP-C2腫瘍モデルを用いて、抗PD-L1抗体との併用により腫瘍増殖抑制効果の増強と生存期間の長期延長効果を認めた。またWT1ペプチドワクチン（Db126）に比較して経口がんワクチン単剤で抗腫瘍効果を劇的に向上させた。③製造・品質管理法の確立と原薬製造菌体培養の基本条件および培地組成を確定した。主要な品質規格として、原薬中のWT1タンパク重量を設定し、その測定方法を確立した。またパイロット生産を実施し原薬（死菌凍結乾燥粉末；B440）を作製し、用法・用量試験に供した。④用法・用量試験従来のマウス薬効試験の用量（4X10e10 cfu/Kg)を、体表面積で補正（除数12.3）して、3.3X10e9 cfu/kg（ヒト）に換算した。またB440、1g中のcfuを１X10e11と概算し、本試験では、マウス10㎎（ヒト2g）を高用量、5㎎（ヒト1g）を中用量、および1㎎（ヒト200㎎）を低用量として設定した。用法としては、週5回、3回、および1回を設定し、投与期間として、1カ月および3カ月を設定した。結果、B440投与群は、コントロール群に比較して、腫瘍増殖を著明に抑制し、生存期間も延長した。最も効果が高かった用法用量は、中用量、週1回、1カ月間投与であった。⑤他癌種での有効性In vitro試験：ヒトDC細胞に440死菌、アジュバントKLHを添加培養。その後、別に培養したCTL細胞と共培養した。ヒト癌細胞（肺腺癌：A549、RERF-Lc-Ad1、膀胱癌：T24）をターゲット細胞として、CTLのIn vitro cytotoxicityを確認した。In vivo試験：マウス膠芽腫細胞株GL261-WT1皮下腫瘍モデルで抗腫瘍効果を確認した。以上より、本経口癌ワクチンは、非小細胞肺癌、尿路上皮癌、神経膠芽腫にも有用と予想される。