平成29年度は次世代型CAR-T細胞の実用化のために必要不可欠となる大量培養システムの開発、その効率化と自動化を目指して、X社の細胞用自動培養装置であるYを用いて培養法の技術開発に取り組んだ。CAR-T細胞の誘導は、T細胞活性化のための初期刺激、遺伝子導入のための培養、遺伝子導入後の拡大培養の3ステップからなっており、それぞれにおいて刺激方法や培養方法、培養期間などの条件の最適化を行った。また、ウイルスベクターの遺伝子導入方法について、組み換えフィブロネクチンを利用する従来法と、プレコーティングを必要としない物質Zを利用する方法を比較検討した。その結果、最も優れた条件下では、最終の全細胞収量が1.4x109細胞、CAR遺伝子導入効率が70%、CAR-T細胞数としての最終収量が7.9x108細胞という結果が認められ、当初の目標を達成する成果が得られた。また、本手法で製造したCAR-T細胞は、標的分子を発現するがん細胞に反応して有意に高いIFN-γの産生を認めた。さらに、本研究により得られたCAR-T細胞大量培養に関する知見として、1）CAR-T細胞拡大培養期間は、連日のサンプリングにより細胞数をリアルタイムで測定し、細胞数に応じて培地を交換・追加する作業が望まれること、2）PMBC活性化のための試薬として、抗CD3/CD28抗体やリコンビナントヒトIL-2が必要であり、特にIL-2については製造するメーカーにより生物活性が異なるため、至適濃度を決定するための予備検討が重要であること、3）遺伝子導入時にはMOIを出来るだけ高くする一方で細胞濃度を過度に高めないため、適度な培地量が求められること、などが明らかとなった。