今年度、研究代表者の大内靖夫はヒトCD8+ T細胞に対する最適な電気穿孔法を用いたゲノム編集ツールの細胞内導入条件を得て、TCRα, TCRβ, PD-1遺伝子に対するゲノム編集を実現し、これらの遺伝子破壊細胞の作成に成功した。また、ヒトT細胞に対する遺伝子ノックイン技術の開発を進めた結果、従来の方法では実現不可能であったが、新たにCRISPR/Staple法（仮名称）を開発し、ヒトCD8+ T細胞における3-4kbの遺伝子ノックインを実現した。本開発技術はヒトT細胞において最大約10%の効率で標的部位に遺伝子をノックインできる革新的な技術であり、現在、特許申請の準備を進めている。さらには本CRISPR/Staple技術を用いることで、One-stepで急性骨髄性白血病(AML)を標的としたがん抗原特異的TCR遺伝子をTCRα定常領域にノックインしたCD8+ T細胞を作成することに成功した。一方、研究分担者のAshwini Patil講師とともに in slicoでの迅速ながん抗原ペプチド、がん抗原特異的TCRの評価および最適化技術の開発を目的とし、スーパーコンピューターを利用したTCR/pMHCI立体構造モデリングに基づく「T細胞免疫反応性予測システム（T cell Immunoreactivity Predicting System: Tips）」を構築した。本システムはタンパク質立体構造データベース(PDB)に存在する全てのTCR/pMHCI立体構造データに基づき、TCR/pMHCIの立体構造を予測し、その反応性をPDBに登録されている全ての立体構造データを元にスコア化するシステムである。本システムを利用することで、既報のがん抗原特異的TCRのpMHCIに対する結合様式を予測し、また抗原認識部位のアミノ酸配列を最適化することで、より高いスコアを示すTCRを得た。研究分担者の西増弘志助教は次世代のゲノム編集ツールの研究開発を進め、新たに複数の新しいCas9, Cpf1タンパク質を作成し、これらのゲノム編集ツールの切断分子機構を明らかにし論文発表すると同時に、研究代表者の大内に提供した。