1. マウス受精卵で相同組換え効率を最大化するため、筑波大・杉山教授との共同研究でゲノム編集酵素であるCas9の改変を行い、改変Cas9発現ベクターを構築した。2. ノックインのためのターゲティングベクターの構築を行った。コンディショナルp53ノックアウト、Pdx1遺伝子座へのCreERT2ノックイン（Pdx1-CreERT2）、ROSA26遺伝子座へのコンディショナル高輝度ルシフェラーゼ遺伝子ノックイン、Kras疾患変異を有するコンディショナルノックインベクターの４種類すべてを完成した。3. マウス受精卵に対しDNAマイクロインジェクションを行い、ゲノム編集によるノックインマウスのファウンダー作出を行った。４種類のターゲティングベクターを用い、各種マイクロインジェクション条件の比較を行い、１回の受精卵へのDNAマイクロインジェクションでノックインマウスが得られる条件を検討した。改変型Cas9を用いた場合に、コンディショナルp53ノックアウトとPdx1-CreERT2のターゲティングベクターでノックインマウスの候補が高効率で得られた。同様な試みを行なったROSA26とKras遺伝子座へのターゲティングベクターについては、１回のDNAマイクロインジェクションではノックインマウスの候補が得られなかった。ES細胞でのゲノム編集によるノックイン効率について、筑波大・杉山教授との共同研究により検討したところ、コンディショナルp53ノックアウトとPdx1-CreERT2のターゲティングベクターでは、ノックインされたES細胞のクローンが高い効率で得られた。一方、ROSA26とKras遺伝子座へのノックイン効率は、10倍以上低いことがわかり、DNAマイクロインジェクションによるノックインマウス作出の成否と相関関係があることが判明した。ノックインマウスの候補が得られなかったROSA26とKras遺伝子座へのノックインについては、ターゲティングベクターの変更やマイクロインジェクションの条件をさらに検討することにより、ノックインマウス樹立の試みを継続する。4. ゲノム編集技術によって作出されるノックインマウスに付随する、見過ごされがちな予期せぬ変異導入事例に遭遇した。ポジティブ・ネガティブ選別を経ない受精卵へのDNAマイクロインジェクションでは、ノックインマウスのファウンダー候補個体にベクターバックボーンが導入されるケースが見受けられた。ベクターバックボーンがゲノム上のターゲット遺伝子座にリンクした挿入であるか否かの判別は、次世代の遺伝解析結果を得るまでわからないが、リソースセンターとしてゲノム編集技術によって作出されたノックインマウスの遺伝品質を管理する上で、新たな注意点を見いだすことができた。今後の品質管理項目に反映させる。5. 既に得られているコンディショナルp53とPdx1-CreERT2ノックインマウスの候補は、ファウンダーマウスとしてC57BL/6系統に戻し交配を行い、系統を樹立する。6. ES細胞を用いたKras遺伝子座へのノックインでは、ターゲティングベクターに含まれる点変異を同時に導入できることが確認された。ターゲティングベクターの受精卵へのマイクロインジェクションにおいて、ノックインはできても点変異を導入できなかった場合には、再度、点変異導入のためのマイクロインジェクションを実施する。ES細胞からのマウス系統の樹立も考慮する。7. 改変Cas9発現ベクターは、投稿中の論文が受理されたのちにBRCから公開する。ターゲティングベクターや各種ノックインマウスに関しても、系統の樹立と並行して公開手続きを進める。