(1)骨肉腫細胞の浸潤におけるRor2の基質タンパク質の同定および機能解析林真琴 助教(神戸大学 大学院医学研究科)は、南康博 教授(神戸大学 大学院医学研究科)、西田満 准教授(神戸大学 大学院医学研究科)、遠藤光晴 講師(神戸大学 大学院医学研究科)らとともに、Ror2受容体型チロシンキナーゼの基質タンパク質を同定することを目的として、iDimerize Inducible Homodimer Systemを利用した二量体化を誘導可能な細胞膜局在型Ror2 intracellular domain (Ror2 ICD)の融合タンパク質(MiD-Ror2 ICD)の発現ベクターを構築した。MiD-Ror2 ICDを発現するヒト骨肉腫細胞株(143B細胞)を用いて、二量体化MiD-Ror2 ICDタンパク質による基質タンパク質のリン酸化を誘導し、リン酸化基質タンパク質の検出を試みた。しかしながら、再現性の良い結果を得ることが出来なかった。このため、ヒト骨肉腫細胞株(SaOS2細胞)をWnt5aで刺激することによって誘導されるリン酸化タンパク質の検出も行った。抗リン酸化チロシン抗体を使用した免疫沈降法および電気泳動法によって、Wnt5a刺激により誘導されるチロシンリン酸化タンパク質を検出できた。しかし、十分な試料を得ることができなかったため質量分析を行うことが出来なかった。そこで、Ror2-ビオチンリガーゼ融合タンパク質(Ror2-BioL)を発現するヒト骨肉腫細胞株(143B細胞)を樹立した。この細胞株を用いて、Ror2に結合するタンパク質(基質タンパク質の候補)をRor2-BioLタンパク質によってビオチン化し、ビオチン化Ror2結合タンパク質をストレプトアビジンビーズによって精製した。その結果、ビオチン化Ror2結合タンパク質を検出できた。しかし、平成28年度内で質量分析を行うに至らなかった。(2)臨床検体におけるRor2による基質タンパク質の発現・リン酸化レベルの解析 林らが同定したRor2基質タンパク質について、前田和洋(東京慈恵会医科大学)が骨肉腫の患者の臨床検体を用いてその発現レベルの解析を行う予定であったが、基質タンパク質の同定に至っておらず解析を行っていない。(3)Ror2とその基質のチロシンリン酸化を阻害する低分子化合物のスクリーニング・システムの構築 林、礒山毅(第一三共株式会社)らがRor2のチロシンキナーゼ活性、あるいはRor2とその基質の相互作用を阻害する低分子化合物(リード化合物)を化合物ライブラリーから同定するハイスループット・スクリーニング(HTS)システムの構築を行う予定であったが、基質タンパク質の同定に至らなかったため行っていない。