AMED研究開発課題データベース 日本医療研究開発機構（AMED）の助成により行われた研究開発の課題や研究者を収録したデータベースです。

• 2020

【成果報告書】

成果の概要

COVID-19患者を現場で迅速に診断するために、POCT (point-of care test、ポイントオブケア検査)を開発した。採取者の安全確保、被採取者の負担軽減のために、鼻咽頭スワブではなく、唾液を被検材料とする開発に重点を置いた。喀痰溶解剤との混和・加熱による臨床検体からの簡易・迅速・安全なRNA抽出法と3セットのLAMPプライマーからなる複合RT-LAMP法を組み合わせて開発した。開発法により、高価で時間を要するRNA抽出キットと遠心分離機を必要とせず、45分以内のCOVID-19診断が可能となった。従来法（核酸抽出キットとリアルタイムRT-PCRを使用）との比較では、鼻咽頭スワブと唾液それぞれにおいて、診断的感度と診断的特異度は、前者が55%(21/38)と100%(50/50)、後者が83％（20/24）と100％（28/28）を示した。開発法の検出限界は250コピー/反応（25,000コピー/mL）だった。研究開始は、血液からの簡易なDNAおよびRNA抽出ができることを確認済のSDBS（ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム）を用いて開発を行った。しかし、唾液からのRNA抽出効率が予想以上に低かった。そのため、喀痰溶解剤であるセミアルカリプロテイナーゼと安価なヒートブロック加熱を併用した簡易なRNA 抽出法を新しく考案した（加熱工程を加えることで、検査者の感染リスク低減も実現した）。開発法は簡易な加熱機器と安価な試薬で診断が可能であるため、唾液検体を用いた実用的なPOCTとしての普及が期待できる（既報による唾液を用いた抗原検出キットの診断的感度はわずか12%であり、実用には適さない。J Clin Microbiol, 58, 2020, e01438-20）。鼻咽頭スワブにおいては、偽陰性となった17検体中14検体と3検体は、それぞれ開発法の検出限界を下回る低ウイルス量、あるいは検出限界付近のボーダーライン上に相当する低いウイルス量を保有していた。それゆえ、検体中ウイルス量の偏りが大きかったことから、有用性の評価は保留した。本開発法は唾液を用いたCOVID-19の検査をより簡易化、迅速化するとともに、感染リスクの低減に貢献し、現場でのCOVID-19簡易検査に利用できる可能性を有している。検出感度を高めるために、さらなる改良を行っている。

学会誌・雑誌等における論文一覧

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1.Yamazaki W, Matsumura Y, Thongchankaew-Seo U, Yamazaki Y, Nagao M. Development of a point-of-care test to detect SARS-CoV-2 from saliva which combines a simple RNA extraction method with colorimetric reverse transcription loop-mediated isothermal amplification detection. Journal of Clinical Virology. 2021, 136, 104760, doi: 10.1016/j.jcv.2021.104760

学会・シンポジウム等における口頭・ポスター

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1.A point-of-care test to detect SARS-CoV-2 from saliva. Yamazaki W., 1st knowledge sharing activity: PSU-Harvard-Kyoto Collaborative Linkages for Microbial Genome Resources, 2021/03/29. 海外(Hat-Yai, Thailand, オンライン開催), 口頭

国外　/　口頭

2.Explaining the Social background of the emergence of COVID-19 and the development of point-of-care (POCT) test for its early diagnosis. Yamazaki W, CSEAS Colloquium, 2020/12/17. 国内, 口頭

国内　/　口頭