AMED研究開発課題データベース 日本医療研究開発機構（AMED）の助成により行われた研究開発の課題や研究者を収録したデータベースです。

• 2021
• 2020

【成果報告書】

成果の概要

1）課題全体の成果の概要
本研究は、ダブルネットワーク(DN)構造を有するハイドロゲルを用いてがん幹細胞を迅速かつ効率良く創り出すHARP 現象について、メカニズムを解明して、臨床応用を目指すものである。前年度の成果で、ハイドロゲルの物理的因子を解明し2 編の英文論文発表を行ってきたが、今年度の研究において、PCDME ゲルとPNaSS ゲルとが高いがん幹細胞誘導能を有する可能性を突き止めた。また、がん細胞の可塑性については、エピジェネティカルな検討で、ヒストン修飾を誘導することが判明した。臨床応用については、従来は悪性脳腫瘍細胞および患者由来検体を用いて新規幹細胞マーカーを同定していたが、本年度の研究では、肝臓がん幹細胞マーカーとしてchemrin 受容体CMKLR1 を同定した。最終目標は、がん幹細胞治療薬のハイスループットスクリーニング法の開発であるが、その基盤となる「ハイドロゲル作製キット」を考案して、特許を出願した（2021 年9 月特許出願）。こららの研究成果は、がんの再発を予測する、がん幹細胞の急速同定法、治療薬選択法の開発、新規のがん幹細胞特異的治療薬の開発の基盤として重要な成果であり、今後の発展が期待される。
2）研究開発項目別の研究実績
＜全体の研究開発項目＞
①研究開発項目（I）ハイドロゲルによるがん幹細胞の誘導メカニズムの解明：PAMPS ゲルの弾性率や表面荷電による刺激は細胞側のインテグリン、イオンチャネル受容体がメカの受容体として作用し、チロシンキナーゼなどの細胞内シグナルを活性化してオステオポンチンの発現を誘導してがん幹細胞化を誘導することが明らかとなった。
②研究開発項目（II）ハイドロゲルによるがん幹細胞診断法の開発：肝がんをモデルとしてDN ゲルによってケモカイン受容体の1 つCMKLR1 が新規肝臓がん幹細胞マーカーであり予後予測因子であることを明らかにした。
③研究開発項目(III) ハイドロゲルによるがん幹細胞治療薬シーズの創出：昨年度の研究では薬剤スクリーニングの予備検討を行い、スクリーニング専用のゲルプレートが必要であることが明らかとなり、本年度の研究で、ゲルシートを装着して、上から96 ウェルプラスチックプレートを装着することで、ハイドロゲルを底面に有する96 ウェルプレートを作成することが可能となった。このプラスチックプレート作成金型作成技術を含めて2021 年9 月に「ゲル作製キット」として特許出願しており、企業と開発契約を定締結してゲルプレート製作を進めている。
＜分担研究開発課題＞
・研究機関、北海道大学（研究代表者：田中伸哉）
分担研究開発課題名（実施内容）ハイドロゲルによるがん不均一性の制御方法の開発：ハイドロゲルの物理的性質について、細胞周囲環境として受け取るための細胞側のメカノレセプターについて検索した。代表的がん遺伝子Ras で形質転換した線維芽細胞を用いてPAMPS ゲルへの吸着する細胞膜成分をTOF-MASS 解析を行ったところ、細胞接着に重要な分子Ｘをメカノレセプターとして同定した。また骨髄由来幹細胞のDN ゲルへの吸着についてはハイドロキシアパタイトが幹細胞誘導に重要な役割を担うことを明らかにして関連論文を2 編発表を行った。
・研究機関、国立がん研究センター（研究分担者：高阪真路）
分担研究開発課題名（実施内容）ハイドロゲルによるがん不均一性制御のゲノム解析：DN ゲルからの刺激によりがん幹細胞へのリプログラミングが単一のcluster で生じるのか、あるいはがん幹細胞スフィア内にも不均一性が存在するか、scRNAseq 解析技術を用いて解析した結果、1 つcluster が幹細胞マーカーが濃縮されていることを解明した。従来報告のあるマーカーに加えて悪性グリオーマの新規がん幹細胞マーカーとしてMAD2L1 を同定した。また、前年度の研究成果よりPLK-1 もマーカー候補であったが、研究代表者の研究室が保管する30 例の悪性膠芽腫の外科切除検体を用いてPLK-1 の免疫染色にて陽性cluster が存在することを明らかにした。
3）研究開発計画の成果の概要
（本年度の研究計画の変更の成果について）
本研究は、当初PAMPS ゲルとPDMAAm を基盤とする、ダブルネットワーク(DN)ゲルを用いて、HARP 現象のメカニズムを解明し、がんの迅速リプログラミングにおけるメカノ受容体、エピジェネティカルな状態を解析し、新規がん幹細胞診断法の開発、薬剤スクリーニング法の開発、個別化医療用ハイドロゲルキットの開発を目指すものであり、キットの特許取得を行い目的を達成した。しかし、この過程で、顕著な進展があったため、研究計画を拡大して研究を遂行した。
具体的には、令和2 年度の研究開発項目（Ｉ）「ハイドロゲルによるがん幹細胞の誘導メカニズムの解明」で大きな進展があり、研究を加速化するために追加の解析を行った。それまではPAMPS をベースとするDN ゲルががん幹細胞を誘導することを基盤として研究を進めていたが、メカニズムを解明するために、硬度・荷電状態の異なるゲルを用いて、がん細胞からがん幹細胞へのリプログラミングに最適なゲルの種類と条件を探索したところ①poly（N-carboxmethyl-N, N-dimethyl-2-methacryloyloxy ethanaminium）（PCDME）（陽性・陰性荷電 76 kPa）と②poly（sodium p-styrene sulfonate）（PNaSS）（陰性荷電 3kPa）の2 つのゲルは、DN ゲルを超える幹細胞誘導能を有する可能性が示された。そこで令和3 年度は、DNゲルに加えて、PCDME、PNaSS ゲルを用いてハイドロゲルキットの開発を行われた。追加検討された2 つのゲルを使用して、脳腫瘍の髄膜腫でPAMPS、PCDME、PNaSS の3 者に共通して誘導されるがん幹細胞マーカーを真の標的分子として解析したところ、分子Ｘが同定された。今後この分子が真のがん幹細胞治療標的シーズとなるかについて検討する。特に分子Ｘには認可された阻害剤が存在するため、この薬剤が臨床応用可能か否かについては今後の更なる検討が必要となる。本研究の成果を用いて、現在有効な治療法がない悪性腫瘍について（悪性胸膜中皮腫、膠芽腫など）、依然として予後不良な腫瘍（膵がんなど）の新規がん幹細胞標的の開発が進められることが期待される。

学会誌・雑誌等における論文一覧

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1.TSUDA M, NOGUCHI M, KURAI T, ICHIHASHI Y, ISE K, WANG L, ISHIDA Y, TANINO M, HIRANO S, ASAKA M, and TANAKA S. Aberrant expression of MYD88 via RNA-controlling CNOT4 and EXOSC3 in colonic mucosa impacts generation of colonic cancer. Cancer Sci. 112, 5100-5113, 2021, 10.1111/cas.15157.

2.KAIBARA T, WANG L, TSUDA M, NONOYAMA T, KUROKAWA T, IWASAKI N, GONG JP, TANAKA S, and YASUDA K. Hydroxyapatite-hybridized double-network hydrogel surface enhances differentiation of bone marrow-derived mesenchymal stem cells to osteogenic cells. J Biomed Mater Res A. 2021, 10.1002/jbm.a.37324.

3.FURIHATA T, TAKADA S, KAKUTANI N, MAEKAWA S, TSUDA M, MATSUMOTO J, MIZUSHIMA W, FUKUSHIMA A, YOKOTA T, ENZAN N, MATSUSHIMA S, HANDA H, FUMOTO Y, NIO-KOBAYASHI J, IWANAGA T, TANAKA S, TSUTSUI H, SABE H, and KINUGAWA S. Cardiac-specific loss of mitoNEET expression is linked with agerelated heart failure. Commun Biol. 4, 138, 2021, 10.1038/s42003-021-01675-4.

4.SASAI K, TABU K, SAITO T, MATSUBA Y, SAIDO TC, and TANAKA S. Difference in the malignancy between RAS and GLI1-transformed astrocytes is associated with frequency of p27(KIP1)-positive cells in xenograft tissues. Pathol Res Pract. 223, 153465, 2021, 10.1016/j.prp.2021.153465.

5.YANAGIYA M, DAWOOD RIH, MAISHI N, HIDA Y, TORII C, ANNAN DA, KIKUCHI H, YANAGAWA MATSUDA A, KITAMURA T, OHIRO Y, SHINDOH M, TANAKA S, KITAGAWA Y, and HIDA K. Correlation between endothelial CXCR7 expression and clinicopathological factors in oral squamous cell carcinoma. Pathol Int. 2021, 10.1111/pin.13094.

6.NAGANO M, KOHSAKA S, HAYASHI T, UENO T, KOJIMA S, SHINOZAKI-USHIKU A, MORITA S, TSUDA M, TANAKA S, SHINOHARA T, OMORI Y, SUGAYA F, KATO H, NARITA Y, NAKAJIMA J, SUZUKI K, TAKAMOCHI K, and MANO H. Comprehensive molecular profiling of pulmonary pleomorphic carcinoma. NPJ Precis Oncol. 5, 57, 2021, 10.1038/s41698-021-00201-3.

7.KOZAWA K, SEKAI M, OHBA K, ITO S, SAKO H, MARUYAMA T, KAKENO M, SHIRAI T, KUROMIYA K, KAMASAKI T, KOHASHI K, TANAKA S, ISHIKAWA S, SATO N, ASANO S, SUZUKI H, TANIMURA N, MUKAI Y, GOTOH N, TANINO M, TANAKA S, NATSUGA K, SOGA T, NAKAMURA T, YABUTA Y, SAITOU M, ITO T, MATSUURA K, TSUNODA M, KIKUMORI T, IIDA T, MIZUTANI Y, MIYAI Y, KAIBUCHI K, ENOMOTO A, and FUJITA Y. The CD44/COL17A1 pathway promotes the formation of multilayered, transformed epithelia. Curr Biol. 31, 3086-3097.e3087, 2021, 10.1016/j.cub.2021.04.078.

8.ISHIO T, KUMAR S, SHIMONO J, DAENTHANASANMAK A, DUBOIS S, LIN Y, BRYANT BR, PETRUS MN, BACHY E, HUANG DW, YANG Y, GREEN PL, HASEGAWA H, MAEDA M, GOTO H, ENDO T, YOKOTA T, HATANAKA KC, HATANAKA Y, TANAKA S, MATSUNO Y, YANG Y, HASHINO S, TESHIMA T, WALDMANN TA, STAUDT LM, and NAKAGAWA M. Genome-wide CRISPR screen identifies CDK6 as a therapeutic target in Adult T-cell leukemia/lymphoma. Blood. 2021, 10.1182/blood.2021012734.

9.田中伸哉, 鈴鹿淳, 王磊, 津田真寿美, グン剣萍, 高阪真路, 間野博行. ハープ現象の発見：DN ゲルでがん幹細胞を創り出す. 実験医学. 39, 2255-2259, 2021.

10.Keiko Tokuchi, Shinya Kitamura, Takuya Maeda, Masashi Watanabe, Shigetsugu Hatakeyama, Satoshi Kano, Shinya Tanaka, Hideyuki Ujiie, Teruki Yanagi, Loss of FAM83H promotes cell migration and invasion in cutaneous squamous cell carcinoma via impaired keratin distribution. Journal of dermatological science, 2021, 104, 112-21, doi: 10.1016/j.jdermsci.2021.09.007

11.Takayuki Nonoyama*, Lei Wang, Ryuji Kiyama, Naohiro Kashimura, Kazunori Yasuda, Shinya Tanaka, Takayuki Kurokawa, Jian Ping Gong, Fast In Vivo Fixation of Double Network Hydrogel to Bone by Monetite Surface Hybridization" Journal of the Ceramic Society of Japan, 129(9), 584-589 (2021.9.1) DOI: 10.2109/jcersj2.21084."

12.Takuya Nishimura, Honglei Guo, Ryuji Kiyama, Yoshinori Katsuyama, Jian Ping Gong, Takayuki Kurokawa*, “In Situ Evaluation of the Polymer Concentration Distribution of Microphase- Separated Polyelectrolyte Hydrogels by the Microelectrode Technique,” Macromolecules, 54(23), 10776-10785 (2021.12.14). (Web 2021.12.1). DOI: 10.1021/acs.macromol.1c01435.

13.Ye Zhang, Kazuki Fukao, Takahiro Matsuda, Tasuku Nakajima, Katsuhiko Tsunoda, Takayuki Kurokawa, Jian Ping Gong*, “Unique Crack Propagation of Double Network Hydrogels under High Stretch,” Extreme Mechanics Letters, 51, 101588 (2022.2.5). (Web 2021.12.18). DOI: 10.1016/j.eml.2021.101588.

14.Gen Matsumae, Mohamad Alaa Terkawi*, Takayuki Nonoyama, Takayuki Kurokawa, Daisuke Takahashi, Tomohiro Shimizu, Ken Kadoya, Jian Ping Gong, Kazunori Yasuda, Norimasa Iwasaki, “Evaluation of Biological Responses to Micro-particles Derived from a Double Network Hydrogel,” Biomaterials Science, published online (2022.3.16) DOI: 10.1039/D1BM01777B.

15.Ikeuchi H, Hirose T, Ikegami M, Takamochi K, Suzuki K, Mano H, and Kohsaka S. Preclinical assessment of combination therapy of EGFR tyrosine kinase inhibitors in a highly heterogenous tumor model. Oncogene. 2022 Mar 19. doi: 10.1038/s41388-022-02263-4. Online ahead of print.

16.Odintsov I, Ortiz MV, Khodos I, Mattar MS, Lui AJW, Kohsaka S, de Stanchina E, Glade Bender JL, Ladanyi M, Somwar R. CIC-mediated modulation of MAPK signaling opposes receptor tyrosine kinase inhibitor response in kinase-addicted sarcoma. Cancer Res. 2022 Jan 24; canres.1397.2021. doi: 10.1158/0008-5472.CAN-21-1397. Online ahead of print.

17.Ikegami M, Kohsaka S*, Hirose T, Ueno T, Inoue S, Kanomata N, Yamauchi H, Mori T, Sekine S, Inamoto Y, Yatabe Y, Kobayashi H, Tanaka S, Mano H. MicroSEC filters sequence errors for formalin-fixed and paraffin-embedded samples. Commun Biol. 2021 Dec 15;4(1):1396. doi: 10.1038/s42003-021-02930-4 (*co-corresponding)

18.Jo H, Yagishita S, Hayashi Y, Ryu S, Suzuki M, Kohsaka S, Ueno T, Matsumoto Y, Horinouchi H, Ohe Y, Watanabe SI, Motoi N, Yatabe Y, Mano H, Takahashi K, Hamada A. Comparative study on the efficacy and exposure of molecular target agents in non-small cell lung cancer PDX models with driver genetic alterations. Mol Cancer Ther. 2021 Dec 15;molcanther.0371.2021. doi: 10.1158/1535-7163.MCT-21-0371. Online ahead of print.

19.Kishikawa S, Hayashi T, Saito T, Takamochi K, Sasa K, Suehara Y, Takahashi F, Sasahara N, Kohsaka S, Suzuki K, Yao T. Distinct properties of pure- and mixed-type high-grade fetal lung adenocarcinomas by genetic profiling and transcription factor expression. Virchows Arch. 2021 Nov 30. doi: 10.1007/s00428-021-03247-7.

20.Kobayashi H, Makise N, Shinozaki-Ushiku A, Ishibashi Y, Ikegami M, Kohsaka S, Ushiku T, Oda K, Miyagawa K, Aburatani H, Mano H, Tanaka S. Scapular Angiomatoid Fibrous Histiocytoma with EWSR1-CREB1 Fusion in an Adult Patient. Case Rep Orthop. 2021 Sep 30;2021:9434222. doi: 10.1155/2021/9434222. eCollection 2021.

学会・シンポジウム等における口頭・ポスター

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1.B 細胞リンパ腫治療中にサイトメガロウイルス膵炎を発症した一剖検例, 秦玉瑩, 三木康祐, 杉野弘和, 大塚拓也, 太田聡, 清水拓, 林敏昭, 酒井基, 田中伸哉, 第110 回日本病理学会総会, 2021/4/22-24, 国内, ポスター

国内　/　ポスター

2.ハイドロゲルを用いた悪性中皮腫細胞の幹細胞性誘導, 杉野弘和, 王磊, 津田真寿美, 鈴鹿淳, 谷野美智枝, 龔剣萍, 田中伸哉, 第110 回日本病理学会総会, 2021/4/22-24, 国内, ポスター

国内　/　ポスター

3.食道リン酸化αシヌクレインの臨床病理学的解析, 種井善一, 齊藤祐子, 伊藤慎治, 松原知康, 坂下泰浩, 池村雅子, 田中伸哉, 仙石錬平, 新井冨生, 村山繁雄, 第110 回日本病理学会総会, 2021/4/22-24, ハイブリッド国内, ポスター

国内　/　ポスター

4.成人型 Krabbe 病の一剖検例, 佐々木美羽, 江端美織, 小田義崇, 濵内朗子, 谷川聖, 種井善一, 杉野弘和, 石田雄介, 佐光一也, 田中伸哉, 第110 回日本病理学会総会, 2021/4/22-24, 国内, ポスター

国内　/　ポスター

5.ハイドロゲルによる癌幹細胞性の誘導を利用した髄膜腫の新規治療標的分子の検索, 小田義崇, 津田真寿美, 湯澤明夏, 王磊, 杉野弘和, 鈴鹿淳, 龔剣萍, 田中伸哉, 第110 回日本病理学会総会,2021/4/22-24, 国内, ポスター

国内　/　ポスター

6.脊髄 capillary hemangioma の臨床病理学的特徴, 種井善一，津田真寿美，谷川聖，杉野弘和，石田雄介，大竹安史，今村博幸，小柳泉，飛騨一利，田中伸哉, 第39 回日本脳腫瘍病理学会, 2021/5/21-22, 国内, ポスター

国内　/　ポスター

7.高分子ハイドロゲルによるリプログラミングを利用した癌幹細胞標的治療薬の同定, 津田真寿美, 鈴鹿淳, 王磊, 田中伸哉, 第25 回日本がん分子標的治療学会学術集会, 2021/5/26-28, 国内, ポスター

国内　/　ポスター

8.51 歳男性の右前頭葉病変, 小田義崇，種井善一，浅野目卓，谷川聖，杉野弘和，鈴鹿淳，Umma Habiba，王磊，石田雄介，津田真寿美，佐藤憲市，中村博彦，田中伸哉, 第62 回日本神経病理学会総会学術研究会, 2021/5/27-29,オンライン国内, 口頭

国内　/　口頭

9.Effect of scaffold stiffness on hydrogel-induced cancer stemness of cancer model cells, Yanpeng Sun, Masumi Tsuda, Lei Wang, Hirokazu Sugino, Jian Ping Gong, Shinya Tanaka, The 39th Sapporo International Cancer Symposium, 2021/7/6-7, ハイブリッド国内, ポスター

国内　/　ポスター

10.Analysis of epigenetic characteristics of sarcoma stem cells induced by multifunctional hydrogels, Yuheng Nie, Masumi Tsuda, Lei Wang, Jian Ping Gong, Shinya Tanaka, The 39th Sapporo International Cancer Symposium, 2021/7/6-7 ハイブリッド国内, ポスター

国内　/　ポスター

11.合成高分子ハイドロゲル誘導滑膜肉腫幹細胞における細胞周期及びEMT/MET 解析, 寺島祐樹, 津田真寿美, 王磊, 龔 剣萍, 田中伸哉, 第17 回日本病理学会カンファレンス, 2021/8/20-21, オンライン 国内, ポスター

国内　/　ポスター

12.高分子ハイドロゲルによる神経膠芽腫幹細胞の誘導メカニズムの解明, 藤島京祐, 津田真寿美, 王磊, 龔 剣萍, 田中伸哉, 第17 回日本病理学会カンファレンス, 2021/8/20-21 , オンライン国内, ポスター

国内　/　ポスター

13.Loss of H3K27me3 is frequent in IDH1-R132H but not in non-canonical IDH1/2 mutated oligodendroglioma: a Japanese cohort study, Umma Habiba, Hirokazu Sugino, Zen-ichi Tanei, Yusuke Ishida, Satoshi Tanikawa, Masumi Tsuda, Shinya Tanaka, 第54 回北海道病理談話会, 2021/9/9, 国内, 口頭

国内　/　口頭

14.腫瘍随伴性天疱瘡またはStevens-Johnson 症候群の合併が疑われた閉塞性細気管支炎の1 剖検例, 中里信一，進藤正信，鎌田啓佑，中久保祥，木村孔一，鈴木雅，今野哲，谷野美智枝，谷川聖，田中伸哉,第122 回日本呼吸器学会北海道支部学術集会（第101 回北海道医学大会）, 2021/9/18, オンライン国内, 口頭

国内　/　口頭

15.元素分析を行った塵肺症の剖検例, 青木佑磨, 田中伸哉, 谷野美智枝, 森山寛史, 第122 回日本呼吸器学会北海道支部学術集会, 2021/9/18, オンライン国内, 口頭

国内　/　口頭

16.新規ハイドロゲルX はエピジェネティックな調節に関与しがん幹細胞性を誘導する, 鈴鹿 淳, 津田真寿美, 王 磊, 粂川 昂平, 丸山 玲緒, 田中伸哉, 第80 回日本癌学会学術総会, 2021/9/30-10/2, 国内, ポスター

国内　/　ポスター

17.大腸正常粘膜においてRNA 制御分子CNOT4 およびEXOSC3 を介したMYD88 の発現亢進は大腸癌の発生に関与する, 津田真寿美, 王磊, 平野聡, 浅香正博, 田中伸哉, 第80 回日本癌学会学術総会, 2021/9/30-10/2 国内, 口頭

国内　/　口頭

18.ハイドロキシアパタイト複合化ダブルネットワークゲル上での骨髄間葉系幹細胞の骨分化能評価, 甲斐原拓真, 王磊, 津田真寿美, 野々山貴行, 黒川孝幸, 龔 剣萍, 岩崎倫政, 田中伸哉, 安田和則, 第36 回日本整形外科学会基礎学術集会, 2021/10/14-15 国内, 口頭

国内　/　口頭

19.転移性骨腫瘍再発を制御するマスターレギュレーターの探索, 清水寛和, 津田真寿美, 王磊, 今城正道, 鈴鹿淳, 谷川聖, 廣田聡, 杉野弘和, 新井隆太, 岩崎倫政, 田中伸哉, 第36 回日本整形外科学会基礎学術集会 2021/10/14-15 国内, 口頭

国内　/　口頭

20.転移性骨腫瘍再発を制御するマスターレギュレーターの探索, 清水寛和, 津田真寿美, 王磊, 今城正道, 谷川聖, 廣田聡, 杉野弘和, 新井隆太, 岩崎倫, 田中伸哉, 第101 回北海道医学大会腫瘍系分科会・第123 回北海道癌談話会例会, 2021/10/16, 国内, 口頭

国内　/　口頭

「国民との科学・技術対話社会」に対する取り組み

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1.ゲルでがんの親分を見つけ出す：がん幹細胞の迅速誘導法の開発にはじめて成功～がんの再発予防，がん幹細胞短時間で検出 北大研究チーム, 読売新聞, 2021/4/6 国内

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2.がん幹細胞をゲルで迅速誘導 北大腫瘍病理 田中教授ら, 北海道医療新聞, 2021/4/9 国内

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3.がん治療法開発挑む病理医, 田中伸哉, NHK おはよう北海道2021/11/2 国内

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4.がん幹細胞を創り出す手法 北大が確立, 田中伸哉, 北海道新聞（2021 医療重大ニュース）, 2021/12/15 国内

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5.がん幹細胞創る方法発見「再発防ぎたい」研究に全力, 田中伸哉, 北海道新聞＜興味深人＞, 2022/2/6 国内

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6.各種機能性高分子ゲルの作製技術と特性制御及び応用展開, 黒川孝幸, R&D リサーチセンター高分子ゲルWEB セミナー, 2021/8/23, 国内（オンライン）.

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7.ハイドロゲルの各種機能性の検討, 黒川孝幸, 富士フィルム講演会, 2021/11/12, 国内（オンライン）.

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8.ハイドロゲルの各種機能性, 黒川孝幸, 北海道大学大学院医学研究院第10 回消化器内科セミナー, 2022/3/8, 国内（オンライン）.

国内